Norfolk'un sahil kenti Great Yarmouth'da dünyaya gelen Matthew Macfadyen, babasının petrol mühendisliği kariyeri nedeniyle çocukluğunu Endonezya ve İskoçya gibi farklı ülkelerde geçirdi. Bu gezgin çocukluk deneyimi, sanatsal hassasiyetini besleyen çeşitli kültürlerle tanışmasını sağladı. Oyunculuğa duyduğu güçlü ilgi onu Londra'daki köklü Kraliyal Dramatik Sanatlar Akademisi'ne (RADA) taşıdı; 1995'te mezun olduktan sonra Cheek by Jowl gibi saygın tiyatro topluluklarıyla klasik sahnelerde pişti. Televizyonda ilk büyük adımını 1998 yapımı Wuthering Heights uyarlamasındaki Heathcliff rolüyle atan Macfadyen, asıl kırılma noktasına BBC'nin gerilim dizisi Spooks ile ulaştı. 2002-2004 yılları arasında ekranlarda yer alan dizide canlandırdığı MI5 ajanı Tom Quinn karakteri, onu İngiltere genelinde tanınan bir isim haline getirdi. Setinde gelecekteki eşi, oyuncu Keeley Hawes ile tanışması ise kariyerinin ötesine geçen bir hayat dönüşümüne kapı araladı. Uluslararası tanınırlık ise 2005'te Joe Wright'ın yönettiği Aşk ve Gurur filmiyle geldi. Keira Knightley'nin karşısında Kira Knightley ile birlikte başrolü paylaştığı bu yapımda, edebiyatın en simgesel erkek karakterlerinden Mr. Darcy'ye kattığı içe dönük karizma ve duygusal derinlik büyük yankı uyandırdı. Ardından Death at a Funeral ve Frost/Nixon gibi yapımlarla hem kara komediye hem de siyasi drama olan yetkinliğini kanıtladı. Little Dorrit dizisindeki performansı ise ona BAFTA En İyi Yardımcı Erkek Oyuncu ödülünü kazandırdı. Kariyerinin tartışmasız zirvesi, HBO'nun 2018-2023 yılları arasında yayınlanan Succession dizisiyle geldi. Zengin ve çökmekte olan bir medya imparatorluğunun gölgesinde var olmaya çalışan Tom Wambsgans'ı hayata geçirirken yaltakçılık, kırılganlık ve fırsatçılığı iç içe geçirdiği performans, hem seyircilerin hem eleştirmenlerin kalbini fethetti. Bu rol ona Emmy Ödülü ve Altın Küre kazandırdı. Succession'ın ardından Quiz dizisinde gerçek bir skandalın kahramanı Binbaşı Charles Ingram'ı, Operation Mincemeat'te ise İkinci Dünya Savaşı'nın en çarpıcı aldatmaca operasyonlarından birinin mimarı Ewen Montagu'yu canlandırdı. 2024'te vizyona giren Deadpool & Wolverine filmiyle Marvel evrenine adım atarak Mr. Paradox rolünü üstlendi. RADA kökenli bu oyuncu, tiyatrodan televizyona, bağımsız sinemadan büyük bütçeli yapımlara uzanan geniş bir yelpazede çalışmaya devam ediyor.